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EXPERIMENT

蛋白实验检测

(一) WESTERN BLOTTING检测

蛋白质(zhi)印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。其(qi)基本原理(li)(li)是通过特异性抗体对凝胶电泳处理(li)(li)过的细胞(bao)或(huo)生物组织样品进行着色， 再(zai)通过分析(xi)着色的位置和(he)着色深度(du)获(huo)得(de)特定蛋白质(zhi)在所分析(xi)的细胞(bao)或(huo)组织中表达情(qing)况的信息。

METHOD

实验方法

SHOW

实验结果展示

INSTRUCTIONS

实验服务说明

(二) ELISA检测

酶联免(mian)疫(yi)吸附测(ce)定(ding)enzyme linked immunosorbent assay（简(jian)写ELISA）指将可溶性(xing)的(de)抗(kang)原或(huo)抗(kang)体(ti)结合到聚苯乙(yi)烯等固(gu)相(xiang)载体(ti)上(shang)， 利(li)用(yong)抗(kang)原抗(kang)体(ti)结合专一性(xing)进行免(mian)疫(yi)反应(ying)的(de)定(ding)性(xing)和(he)定(ding)量检测(ce)方法。

METHOD

分类方法

A、定性测定

定(ding)性(xing)测(ce)(ce)定(ding)的(de)结果判断(duan)是对受检标本(ben)中是否(fou)含有待测(ce)(ce)抗原(yuan)或抗体(ti)作出(chu)"有"或"无(wu)(wu)"的(de)简单回答，分别用"阳(yang)性(xing)"、"阴性(xing)"表(biao)示(shi)(shi)。 "阳(yang)性(xing)"表(biao)示(shi)(shi)该标本(ben)在(zai)(zai)该测(ce)(ce)定(ding)系(xi)统(tong)中有反应(ying)。"阴性(xing)"则为(wei)(wei)无(wu)(wu)反应(ying)。用定(ding)性(xing)判断(duan)法也可得到半(ban)定(ding)量结果，即用滴(di)度(du)(du)(du)来(lai)表(biao)示(shi)(shi)反应(ying)的(de)强度(du)(du)(du)， 其实(shi)质仍(reng)是一(yi)个定(ding)性(xing)试验(yan)。在(zai)(zai)这(zhei)种半(ban)定(ding)量测(ce)(ce)定(ding)中，将标本(ben)作一(yi)系(xi)列稀释后(hou)进(jin)行(xing)试验(yan)，呈阳(yang)性(xing)反应(ying)的(de)最高稀释度(du)(du)(du)即为(wei)(wei)滴(di)度(du)(du)(du)。 根据滴(di)度(du)(du)(du)的(de)高低，可以判断(duan)标本(ben)反应(ying)性(xing)的(de)强弱(ruo)，这(zhei)比观(guan)察不(bu)稀释标本(ben)呈色的(de)深浅判断(duan)为(wei)(wei)强阳(yang)性(xing)、弱(ruo)阳(yang)性(xing)更具定(ding)量意义。

在(zai)间接法和夹心(xin)法ELISA中，阳性(xing)孔(kong)呈色深(shen)于阴性(xing)孔(kong)。在(zai)竞(jing)争法ELISA中则相反，阴性(xing)孔(kong)呈色深(shen)于阳性(xing)孔(kong)。

B、定量测定

ELISA操作(zuo)步骤复杂，影响反应因素(su)较多，特别是固(gu)相载体(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)包被难达(da)(da)到各个体(ti)之间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一致，因此在(zai)定(ding)量(liang)测(ce)(ce)(ce)定(ding)中(zhong)(zhong)，每批(pi)测(ce)(ce)(ce)试均须用 一系列不(bu)同(tong)浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)参考标(biao)准(zhun)品在(zai)相同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)条件下制作(zuo)标(biao)准(zhun)曲线(xian)(xian)。测(ce)(ce)(ce)定(ding)大分子量(liang)物(wu)(wu)质(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)夹心(xin)法ELISA，标(biao)准(zhun)曲线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)范围一般(ban)较宽(kuan)， 曲线(xian)(xian)最高点的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸光度(du)(du)可接(jie)近(jin)2.0，绘制时常(chang)用半对数值，以(yi)检(jian)测(ce)(ce)(ce)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)为(wei)横坐标(biao)，以(yi)吸光度(du)(du)为(wei)纵坐标(biao)，将各浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)值逐点连(lian)接(jie)， 所得曲线(xian)(xian)一般(ban)呈(cheng)S形(xing)，其头、尾部(bu)(bu)曲线(xian)(xian)趋于平坦，中(zhong)(zhong)央较呈(cheng)直线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)部(bu)(bu)分是最理想的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)检(jian)测(ce)(ce)(ce)区域。测(ce)(ce)(ce)定(ding)小分子量(liang)物(wu)(wu)质(zhi)常(chang)用竞争法， 其标(biao)准(zhun)曲线(xian)(xian)中(zhong)(zhong)吸光度(du)(du)与受(shou)检(jian)物(wu)(wu)质(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)呈(cheng)负相关(guan)。标(biao)准(zhun)曲线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)状因试剂(ji)盒所用模式的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)差别而(er)略有不(bu)同(tong)。ELISA测(ce)(ce)(ce)定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)标(biao)准(zhun)曲线(xian)(xian)注意图中(zhong)(zhong) 横坐标(biao)为(wei)对数关(guan)系，这更有利于测(ce)(ce)(ce)定(ding)系统的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表达(da)(da)。

(三) TUNEL法检测细胞凋亡

细(xi)胞(bao)在发(fa)生凋亡时，会(hui)激活一(yi)些(xie)DNA内切(qie)酶，这些(xie)内切(qie)酶会(hui)切(qie)断(duan)核(he)小体间的(de)(de)(de)(de)基因组DNA。细(xi)胞(bao)凋亡时抽提(ti)DNA进行(xing)电泳检测(ce)， 可以(yi)发(fa)现180-200bp的(de)(de)(de)(de)DNA ladder。基因组DNA断(duan)裂时，暴露的(de)(de)(de)(de)3’-OH可以(yi)在末端脱氧核(he)苷(gan)酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的(de)(de)(de)(de)催化(hua)下加(jia)上荧光素 (FITC) 标记的(de)(de)(de)(de)dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以(yi)通过(guo)荧光显微(wei)镜或流式细(xi)胞(bao)仪进行(xing)检测(ce)， 这就是(shi)TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法(fa)检测(ce)细(xi)胞(bao)凋亡的(de)(de)(de)(de)原理。

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