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EXPERIMENT

蛋白实验检测

(一) WESTERN BLOTTING检测

蛋(dan)白(bai)质印(yin)迹(ji)法（免疫印(yin)迹(ji)试验）即Western Blot。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电(dian)泳(yong)处理过的(de)细胞(bao)或生物组织样品(pin)进行着色(se)， 再通过分(fen)析着色(se)的(de)位(wei)置和着色(se)深(shen)度(du)获得特定蛋(dan)白(bai)质在所分(fen)析的(de)细胞(bao)或组织中表达情况的(de)信息。

METHOD

实验方法

SHOW

实验结果展示

INSTRUCTIONS

实验服务说明

(二) ELISA检测

酶(mei)联免(mian)疫吸(xi)附测(ce)定(ding)enzyme linked immunosorbent assay（简(jian)写ELISA）指将可溶性(xing)的抗原或抗体(ti)(ti)结(jie)合到聚(ju)苯(ben)乙烯等固相载体(ti)(ti)上， 利用抗原抗体(ti)(ti)结(jie)合专一性(xing)进行免(mian)疫反应的定(ding)性(xing)和定(ding)量检测(ce)方(fang)法。 

METHOD

分类方法

A、定性测定

定性(xing)(xing)(xing)测(ce)定的结果判(pan)(pan)断是对受检标本(ben)(ben)中(zhong)是否(fou)含有待测(ce)抗(kang)原或抗(kang)体作出"有"或"无(wu)(wu)"的简单回答，分(fen)别用(yong)(yong)"阳(yang)性(xing)(xing)(xing)"、"阴性(xing)(xing)(xing)"表(biao)示(shi)。 "阳(yang)性(xing)(xing)(xing)"表(biao)示(shi)该标本(ben)(ben)在该测(ce)定系(xi)统中(zhong)有反应。"阴性(xing)(xing)(xing)"则为(wei)无(wu)(wu)反应。用(yong)(yong)定性(xing)(xing)(xing)判(pan)(pan)断法也可得到半定量结果，即(ji)用(yong)(yong)滴(di)度来表(biao)示(shi)反应的强度， 其实(shi)质仍是一个定性(xing)(xing)(xing)试验(yan)。在这(zhei)种半定量测(ce)定中(zhong)，将标本(ben)(ben)作一系(xi)列稀(xi)释(shi)后进(jin)行试验(yan)，呈(cheng)阳(yang)性(xing)(xing)(xing)反应的最(zui)高稀(xi)释(shi)度即(ji)为(wei)滴(di)度。 根据滴(di)度的高低，可以判(pan)(pan)断标本(ben)(ben)反应性(xing)(xing)(xing)的强弱，这(zhei)比观察(cha)不(bu)稀(xi)释(shi)标本(ben)(ben)呈(cheng)色的深浅判(pan)(pan)断为(wei)强阳(yang)性(xing)(xing)(xing)、弱阳(yang)性(xing)(xing)(xing)更具定量意义。

在(zai)(zai)间接法和夹(jia)心(xin)法ELISA中(zhong)，阳性(xing)孔(kong)(kong)呈色深于阴(yin)性(xing)孔(kong)(kong)。在(zai)(zai)竞争法ELISA中(zhong)则相反，阴(yin)性(xing)孔(kong)(kong)呈色深于阳性(xing)孔(kong)(kong)。

B、定量测定

ELISA操作步(bu)骤复杂(za)，影响反应(ying)因素较(jiao)多，特别是(shi)固相载体的(de)(de)包(bao)被难(nan)达到各个体之间的(de)(de)一(yi)(yi)致，因此(ci)在定量(liang)(liang)测(ce)定中(zhong)(zhong)，每(mei)批测(ce)试(shi)均须(xu)用(yong)(yong) 一(yi)(yi)系列不(bu)同(tong)浓度(du)(du)的(de)(de)参考标(biao)准品在相同(tong)的(de)(de)条件下制(zhi)(zhi)作标(biao)准曲(qu)线(xian)。测(ce)定大分(fen)子量(liang)(liang)物(wu)(wu)质的(de)(de)夹心法ELISA，标(biao)准曲(qu)线(xian)的(de)(de)范围一(yi)(yi)般(ban)较(jiao)宽， 曲(qu)线(xian)最(zui)高点的(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)(du)可接近(jin)2.0，绘制(zhi)(zhi)时(shi)常用(yong)(yong)半对数(shu)值，以检测(ce)物(wu)(wu)的(de)(de)浓度(du)(du)为横坐标(biao)，以吸(xi)光(guang)度(du)(du)为纵坐标(biao)，将各浓度(du)(du)的(de)(de)值逐点连接， 所(suo)得曲(qu)线(xian)一(yi)(yi)般(ban)呈(cheng)S形，其头、尾部(bu)曲(qu)线(xian)趋于(yu)平坦(tan)，中(zhong)(zhong)央较(jiao)呈(cheng)直线(xian)的(de)(de)部(bu)分(fen)是(shi)最(zui)理想的(de)(de)检测(ce)区域。测(ce)定小(xiao)分(fen)子量(liang)(liang)物(wu)(wu)质常用(yong)(yong)竞争法， 其标(biao)准曲(qu)线(xian)中(zhong)(zhong)吸(xi)光(guang)度(du)(du)与(yu)受检物(wu)(wu)质的(de)(de)浓度(du)(du)呈(cheng)负(fu)相关。标(biao)准曲(qu)线(xian)的(de)(de)形状因试(shi)剂盒所(suo)用(yong)(yong)模式的(de)(de)差别而略有(you)不(bu)同(tong)。ELISA测(ce)定的(de)(de)标(biao)准曲(qu)线(xian)注意图中(zhong)(zhong) 横坐标(biao)为对数(shu)关系，这更有(you)利(li)于(yu)测(ce)定系统的(de)(de)表达。

(三) TUNEL法检测细胞凋亡

细(xi)胞(bao)(bao)在发(fa)生(sheng)凋亡(wang)(wang)时，会激活一些DNA内(nei)切(qie)酶(mei)(mei)，这些内(nei)切(qie)酶(mei)(mei)会切(qie)断(duan)(duan)核(he)小体间的(de)(de)基(ji)(ji)因(yin)组DNA。细(xi)胞(bao)(bao)凋亡(wang)(wang)时抽提DNA进行(xing)电泳检(jian)测(ce)， 可(ke)以(yi)发(fa)现180-200bp的(de)(de)DNA ladder。基(ji)(ji)因(yin)组DNA断(duan)(duan)裂(lie)时，暴露的(de)(de)3’-OH可(ke)以(yi)在末(mo)端脱氧(yang)核(he)苷酸(suan)转移酶(mei)(mei)(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的(de)(de)催化下(xia)加上荧光素 (FITC) 标记的(de)(de)dUTP (fluorescein-dUTP) ，从(cong)而可(ke)以(yi)通(tong)过(guo)荧光显(xian)微镜或流式细(xi)胞(bao)(bao)仪进行(xing)检(jian)测(ce)， 这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检(jian)测(ce)细(xi)胞(bao)(bao)凋亡(wang)(wang)的(de)(de)原理。

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