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EXPERIMENT

蛋白实验检测

(一) WESTERN BLOTTING检测

蛋白(bai)质印迹法（免疫(yi)印迹试验）即Western Blot。其(qi)基本原理(li)是通(tong)过特(te)异性抗体对凝(ning)胶电泳处理(li)过的(de)细胞(bao)或(huo)(huo)生物组织(zhi)样品进行着色(se)， 再通(tong)过分析着色(se)的(de)位置(zhi)和着色(se)深度(du)获得(de)特(te)定蛋白(bai)质在所(suo)分析的(de)细胞(bao)或(huo)(huo)组织(zhi)中表达情况的(de)信息。

METHOD

实验方法

SHOW

实验结果展示

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实验服务说明

(二) ELISA检测

酶联免疫(yi)(yi)吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的(de)抗原(yuan)或抗体结合到(dao)聚苯乙烯等(deng)固相载体上， 利用抗原(yuan)抗体结合专一性进(jin)行免疫(yi)(yi)反应(ying)的(de)定性和定量检测方法(fa)。

METHOD

分类方法

A、定性测定

定(ding)(ding)性(xing)(xing)测定(ding)(ding)的(de)结(jie)果判断(duan)是(shi)对受检标(biao)(biao)本(ben)(ben)中是(shi)否含有(you)(you)待测抗原(yuan)或抗体作(zuo)出"有(you)(you)"或"无(wu)(wu)"的(de)简(jian)单回答，分(fen)别用"阳(yang)(yang)性(xing)(xing)"、"阴性(xing)(xing)"表示。 "阳(yang)(yang)性(xing)(xing)"表示该标(biao)(biao)本(ben)(ben)在该测定(ding)(ding)系(xi)统中有(you)(you)反(fan)(fan)应(ying)(ying)(ying)。"阴性(xing)(xing)"则为无(wu)(wu)反(fan)(fan)应(ying)(ying)(ying)。用定(ding)(ding)性(xing)(xing)判断(duan)法也可得到(dao)半定(ding)(ding)量结(jie)果，即用滴度来表示反(fan)(fan)应(ying)(ying)(ying)的(de)强(qiang)度， 其实质仍(reng)是(shi)一(yi)个定(ding)(ding)性(xing)(xing)试(shi)验。在这种半定(ding)(ding)量测定(ding)(ding)中，将标(biao)(biao)本(ben)(ben)作(zuo)一(yi)系(xi)列稀释(shi)后进行试(shi)验，呈阳(yang)(yang)性(xing)(xing)反(fan)(fan)应(ying)(ying)(ying)的(de)最高稀释(shi)度即为滴度。 根据滴度的(de)高低，可以判断(duan)标(biao)(biao)本(ben)(ben)反(fan)(fan)应(ying)(ying)(ying)性(xing)(xing)的(de)强(qiang)弱，这比(bi)观(guan)察不稀释(shi)标(biao)(biao)本(ben)(ben)呈色的(de)深(shen)浅判断(duan)为强(qiang)阳(yang)(yang)性(xing)(xing)、弱阳(yang)(yang)性(xing)(xing)更具定(ding)(ding)量意义(yi)。

在间接法和夹心法ELISA中(zhong)，阳性(xing)孔呈色(se)深于(yu)阴性(xing)孔。在竞争法ELISA中(zhong)则相反(fan)，阴性(xing)孔呈色(se)深于(yu)阳性(xing)孔。

B、定量测定

ELISA操作(zuo)步骤复(fu)杂，影响反应因(yin)素较多，特别是(shi)固(gu)相载体(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)包被(bei)难(nan)达到(dao)各个体(ti)之间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)致，因(yin)此在(zai)定量(liang)测(ce)(ce)定中(zhong)，每批测(ce)(ce)试(shi)均须用(yong)(yong) 一(yi)(yi)系(xi)列(lie)不(bu)同浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)参考标(biao)(biao)(biao)准(zhun)品在(zai)相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)条(tiao)件下制作(zuo)标(biao)(biao)(biao)准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)。测(ce)(ce)定大分子量(liang)物质(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)夹心法(fa)ELISA，标(biao)(biao)(biao)准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)范围一(yi)(yi)般较宽， 曲(qu)(qu)线(xian)(xian)最(zui)高点的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸光度(du)(du)可接(jie)近2.0，绘(hui)制时常用(yong)(yong)半对数(shu)值，以检(jian)测(ce)(ce)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)为(wei)横(heng)坐标(biao)(biao)(biao)，以吸光度(du)(du)为(wei)纵坐标(biao)(biao)(biao)，将各浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)值逐点连接(jie)， 所(suo)得曲(qu)(qu)线(xian)(xian)一(yi)(yi)般呈(cheng)S形，其头(tou)、尾部(bu)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)趋于(yu)(yu)平坦，中(zhong)央(yang)较呈(cheng)直线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)部(bu)分是(shi)最(zui)理想的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)检(jian)测(ce)(ce)区域。测(ce)(ce)定小分子量(liang)物质(zhi)常用(yong)(yong)竞争法(fa)， 其标(biao)(biao)(biao)准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)中(zhong)吸光度(du)(du)与受(shou)检(jian)物质(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)浓(nong)(nong)(nong)度(du)(du)呈(cheng)负相关。标(biao)(biao)(biao)准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)形状因(yin)试(shi)剂盒所(suo)用(yong)(yong)模式的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)差别而略(lve)有不(bu)同。ELISA测(ce)(ce)定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)标(biao)(biao)(biao)准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian)(xian)注意图(tu)中(zhong) 横(heng)坐标(biao)(biao)(biao)为(wei)对数(shu)关系(xi)，这更有利于(yu)(yu)测(ce)(ce)定系(xi)统的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表达。

(三) TUNEL法检测细胞凋亡

细(xi)(xi)胞(bao)(bao)在(zai)发(fa)生凋亡(wang)时，会(hui)激活一些DNA内切酶(mei)，这些内切酶(mei)会(hui)切断核小(xiao)体(ti)间的(de)基因(yin)组(zu)DNA。细(xi)(xi)胞(bao)(bao)凋亡(wang)时抽提(ti)DNA进行电泳检测(ce)， 可(ke)以(yi)发(fa)现180-200bp的(de)DNA ladder。基因(yin)组(zu)DNA断裂(lie)时，暴(bao)露(lu)的(de)3’-OH可(ke)以(yi)在(zai)末端脱氧核苷酸(suan)转移(yi)酶(mei)(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的(de)催化下(xia)加上荧光(guang)素 (FITC) 标记的(de)dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可(ke)以(yi)通过荧光(guang)显微镜或流式细(xi)(xi)胞(bao)(bao)仪进行检测(ce)， 这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测(ce)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)凋亡(wang)的(de)原理。

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